Tissue Culture Vinkkejä

Kudosviljelytutkimusten on leviämistä solujen nestemäistä kasvualustaa laboratoriossa eri tieteellisiin tarkoituksiin. Esimerkiksi solukkoviljelmät käytetään diagnosointiin geneettinen sairaus, kuten keskipitkän kasvaa solunsisäisiä taudinaiheuttajia, kuten bakteereita tai viruksia tai tutkimuksia itse soluja. Tissue Culture Solut

solujen kiinni pohjat petrimaljoja tai pysyvät suspendoitu nesteeseen. Solut voivat olla kasvi-tai eläinperäiset. Käytetyt solut kudosviljelmiin voi olla ensisijainen soluja, eli ne otettiin talteen suoraan organismista tai solulinjasta, joka on säilytetty kulttuuriin. Cell linjat ovat usein syöpäsoluja, ja tämä on otettava huomioon suunniteltaessa tai tulkinnassa kokeita.
Treat Cells varovasti

Adherentit solut poistetaan niiden petrimaljassa kulun kaapimalla tai proteaasi, yleensä trypsiini ja EDTA. Kaavinta tappaa paljon soluja ja niitä tulee käyttää vain, kun valmistautuu solulysaateista (nestevalmisteet solun sisällön analyysiä varten) tai kun trypsiini /EDTA on ehdottomasti vältettävä.

Trypsiinikäsittely poistaa paitsi proteiineja, jotka noudattavat solujen lautasen mutta useimmat muut proteiinit kalvo kennon myös. Solut pallo ylös ja kestää jonkin aikaa, yleensä yön yli, palauttamaan side astia. Lisätään minimaalinen määrä trypsiiniä - noin 1 ml ja 25cm2 pullo - keinutuoli pulloon viisi sekuntia tai vähemmän päällystää yksikerroksisen ja sitten kaatamalla pois tai imemällä ylimääräinen trypsiini vähentää määrää trypsiinin johon yksikerroksista on alttiina. Anna solut loput yrityshautomo aikana trypsinoimalla.

Jälkeen solut liukumaan pois astian pohjalle, lisää median seerumin ja imetään lysaatti ylös ja alas pipetoidaan varovasti. Salli hieman media jäädä lautasen kun pipetillä ylös ja alas useita kertoja hajota möhkäleitä ja saada jopa keskeyttämistä.

Ei saa imeskellä kuplia pipetin. Älä myöskään voimakkaasti sekoita tai pyörre solususpensioon; solut ovat hyvin hauraita tässä paljaina mukaiseen tilaan.
Lämmittää Inactivate vai eikö Kuumenna Inactivate

Soluviljelytekniikat olivat lapsenkengissä, nautasikiöseerumia (FBS) oli tunnettu sisältävän komplementtiproteiineja, jotka ovat immuunijärjestelmän proteiineja, jotka solujen hajottamiseksi. Komplementtiproteiineja eivät ole toivottavia soluviljelmässä. Lämpö inaktivoivasti FBS 56 asteessa 30 minuuttia tulee tehdä komplementtiproteiineja aktiivinen. Prewarming FBS 37 ° C myös riittää inaktivoi komplementtiproteiineja.

Alkuaikoina, lämmön inaktivoivien FBS tappoi myös mykoplasma ja muita epäpuhtauksia. Tuolloin suodatin sterilointi suoritettiin 0.45um suodattimia. Tänään suodatin steriloida FBS ja median kautta 0.1um tai jopa 0.04um suodattimia. Ei mykoplasma painuu läpi.

Tämä jättää meille vai eivät lämmittää inaktivoi.

Heat inaktivoitumista hajoaa kaikki osat FBS - kuten vitamiineja, aminohappoja ja kasvutekijöitä - mahdollisesti alittavia joitakin nirso solulinjoilla.
p Jos olet työskennellyt hidaskasvuisia tai nirso solulinja, pitää vain steriloimalla oman FBS. Saatat löytää lisää luotettavuutta teidän solut.