Kuinka tehdä restriktiokarttaa

Alkuaikoina molekyylibiologian, tutkijat yleisesti käytetty restriktiokartoituksella ymmärtää geenien he opiskelivat. Nykyaikaisessa tutkimuslaboratoriot, restriktiokartoituksella on pitkälti vanhentunut, koska jaksotus on tullut laajemmin saataville ja edullisempia kuin aikaisemmin. On kuitenkin olemassa tapauksia, joissa restriktiokartta voi olla riittävä tutkija suorittaa hänen tutkimuksia. Yleinen lähestymistapa restriktiokartoituksella liittyy käytön ruoansulatusentsyymejä murtaa fyysisesti näyte DNA. Kun mitataan tuotteita tämän ruoansulatusta, voit "koota" kappaletta ja päätellä alkuperäisen sekvenssin DNA. Asiat Tarvitset
Restriktioentsyymejä
Sample DNA
Puskuriliuos
Ice ja kuuman veden
geelielektroforesointi laitteet
Näytä lisää Ohjeet
DNA ruoansulatus

1

Lisää restriktioentsyymi teidän DNA-näyte. Käytä EcoR1, yleisesti käytetty entsyymi, esimerkiksi.
2

Lisää tämä seos puskuriliuosta, joka on lähinnä paikka, jotta reaktio tapahtuu.
3

Nosta reaktion lämpötila, kuten New England Biolabs oppaat. Kukin restriktioentsyymillä on erityinen reaktion lämpötila, jossa se toimii parhaiten. Lisäksi jokainen entsyymi on tietty nukleotidisekvenssi on suunniteltu kohde. EcoRI skannaa ja leikkaa DNA nukleotidisekvenssi CAATTC. Juuri tämän nukleotidien järjestystä on olemassa entsyymin sitoa ja leikata DNA. Tähän saakka kaikki materiaalit olisi pidetty jäissä estää luvattomat toimenpiteet.
4

jälkeen kun reaktio esiintyä käyttöohjeessa, ajaa seos geelielektroforeesi kone erottaa DNA fragmentit koon perusteella. Pienin fragmentit siirtyy kauimpana geelin poikki.
5

Mittaa kulkema kukin DNA-fragmentti. Nämä viisi vaihetta tulee toistaa useita eri entsyymejä erikseen.
Rakentaminen restriktiokartan
6

käyttäminen saatujen tietojen geeli, kerätä kaikki tiedot olet löytänyt käyttämällä eri restriktioentsyymejä.
7

Pättele järjestyksessä restriktiokohdat vertaamalla eri fragmentti pituudet tuotettu kutakin entsyymiä. Jos esimerkiksi entsyymi # 1 tuotti kaksi palasia samanpituisia ja entsyymi # 2 tuotti kolme palasia yhtä pitkiä, voit päätellä, että entsyymi # 1 leikkauksia puolivälissä DNA ja entsyymin # 2 leikkaukset DNA kolmasosaa.

8

käyttäminen johtopäätökset vaiheessa 2, koota järjestyksessä restriktiokohtien DNA.