Cell - pohjainen ELISA pöytäkirjan

ELISA tai entsyymi - immunologinen määritys , käytetäändiagnostiikassa lääketieteen ja biologian tutkimuksen määrällisestimäärä tiettyyn proteiiniin . ELISA käyttää vasta-aineiden havaitsemiseksi kiinnostuksen kohteena olevaa proteiinia , jareagenssin , joka tuottaavärin . Värin määrä liittyy proteiinin määrä . Cell Culture

Solut sijoitetaankuoppiin96 - kuoppalevyllä ja 100 mikro - litraa kasvualustaa jasolujen annettiin laskeutua yön yli. Jos opiskeletsolujen reaktiotekijä , solut olisi seerumin nälkään 24 tuntia ja sitten stimuloidaantekijä tutkittavana.
Kiinnitys ja perusterveydenhuollon Vasta

poistamisen jälkeenmedian ,soluja käsitellään kiinnitysnesteeseen kuten 3 prosenttia formaldehydiä , tai metanoli . Solukalvon on läpäiseviksi , jotta vasta-aineen tunkeutumaan soluun . Permeabilization voidaan saavuttaa käyttämällä 0,1 prosenttia Triton , jos metanoli ei ole aikaisemmin käytetty . Ei-spesifinen sitoutuminen voidaan estää käyttämällä 10 prosenttia vasikan sikiön seerumia laimennettiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella . Poistamisen jälkeen lohko , ensisijainen vasta-ainetta voidaan käyttää , ja inkuboitiin yhden tunnin ajan .
Toisen vasta-aineen ja Stain

Poista ensisijainen vasta-aine , ja pese kolme kertaa . Lisää toissijainen vasta-aine liittyyhavaitseminen ainetta, kuten piparjuuriperoksidaasi . Inkuboidaantunnin ajan . Wash Lisää kemiluminesenssi substraattiliuosta . Kehittää ja skannatalevy värikylläisyyttä .